1  抑菌圈法

將濾紙剪成 1cm 直徑的圓紙片，放在被測殺菌劑中浸透并瀝干，然后把紙片貼在已經(jīng)接種了菌種的瓊脂平板中央，36℃左右培養(yǎng) 48h。若殺菌劑有抑菌效果，則紙片周圍沒有菌落成長，從而形成一個(gè)圓形透明的抑菌 圈，用直尺量 取抑菌圈直徑。抑菌圈直徑越大，被測殺菌劑的抑菌效果越好。抑菌圈法用于初選殺菌劑，具有簡易、快速、結(jié)果明了等優(yōu)點(diǎn)。

2  玉米粉法

在 100mL 具塞量筒中配制濃度為 5%的切削液 90 mL，分別加入鑄鐵屑 2g，玉米粉 3g，菌種 5mL(活菌總數(shù)大于 5×10 cfu/mL)，置于 30~38℃環(huán)境條件下，每 24h振搖一次，觀察切削液氣味和外觀變化，記錄切削液發(fā)生 腐敗發(fā)臭的天 數(shù)。玉米粉法用于驗(yàn)證切削液靜止條件下的抗菌效果  。

3  靜態(tài)試驗(yàn)法

靜態(tài)試驗(yàn)法是在 200ml 的玻璃容器內(nèi)裝入 100ml 試驗(yàn)液，10%鑄鐵屑，5%潤滑油，5%水基切削液腐敗液，并準(zhǔn)備四份，在 37℃下放置 4 周。每隔一周取出其中的一份，進(jìn)行外觀、pH 值、微生物試驗(yàn)。根據(jù) pH 值的降低程度和微生物的繁殖程度判定試驗(yàn)液的腐敗狀態(tài)，作出生物穩(wěn)定性評價(jià)。此 方法的優(yōu)點(diǎn)是 能夠簡便地進(jìn)行多種切削液間的比較或切削液不同稀釋濃度間的比較。

4  動(dòng)態(tài)試驗(yàn)法(循環(huán)試驗(yàn))

根 據(jù)  ASTM  D3946-92《 Standard  Test  Methods  for  Evaluating  the  Bacteria Resistance  of  Water–Dilutable  Metalworking  Fluid》，即《評價(jià)水基金屬加工液抗菌性能試驗(yàn)方法》，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)建立水基切削液抗微生物性能測試平臺(tái)，進(jìn)行生物穩(wěn)定性評價(jià)。此方法是通過模擬現(xiàn)場使用條件進(jìn) 行動(dòng)態(tài)循環(huán)試驗(yàn) 以評價(jià)水基金 屬切削液的生物穩(wěn)定性。利用此方法可以得到不同 水基切削液的相 對抗微生物性 能試驗(yàn)結(jié)果。與抑菌圈法相比，它更能較好地說明 水基切削液在現(xiàn) 場使用中表現(xiàn) 出的生物穩(wěn)定性及可能出現(xiàn)的其他問題。這種方法 的缺點(diǎn)是試驗(yàn)時(shí) 間較長。本文 將采取動(dòng)態(tài)試驗(yàn)方法進(jìn)行水基金屬切削液的生物穩(wěn)定性研究。

主要材料：

灰口鑄鐵鐵屑(20~40 目)；

自來水(硬度為 100～150ppm)；

營養(yǎng)物質(zhì)(玉米淀粉、干酪素)；

菌種(現(xiàn)場取來的腐敗水基金屬切削液，恒溫培養(yǎng)后細(xì)菌菌落總數(shù)>10 mL，真

菌菌落總數(shù)>10 mL)；

SANI-CHECK 測菌片(美國 Biosan Laboratories, Inc.生產(chǎn)) 。

試驗(yàn)中所用儀器：

PHS-3B 型精密酸度計(jì)(上海雷磁儀器廠)；

E-201-C 型 PH 復(fù)合電極(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；

DHP781 型電熱恒溫培養(yǎng)箱(湖北黃石醫(yī)療器械廠)；

HHSY21-Ni 型電熱恒溫水浴鍋(北京長源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠)；

CX-0088 型增氧泵(中山小欖創(chuàng)星電器廠)；

OLYMPUS BX51 型顯微鏡(深圳市綠山科技有限公司)。

具體試驗(yàn)步驟如下：

在 1L 的燒杯中，加入 900mL 濃度為 3%的含有不同殺菌劑的水基金屬切削液，再添加 100mL 培養(yǎng)好的菌種和 10g 鐵屑、玉米淀粉、干酪素等微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)，攪拌均勻后取出 100mL 分別進(jìn)行細(xì)菌、真菌、pH 值等的評定，并觀察試驗(yàn)液的外觀。 將燒杯置于30℃恒溫水浴鍋內(nèi)，通空氣(200mL/min)于試液中，七天為一周期，每個(gè)周期通氣5天，停氣2天，期間及時(shí)補(bǔ)加無菌水以補(bǔ)充因蒸發(fā)而引起的損失。每天 進(jìn)行試驗(yàn)液的pH值測定、觀察外觀變化和 臭氣散發(fā)等情況，通氣5天和停 氣2天后分別進(jìn)行細(xì)菌和真菌數(shù)量測定。重復(fù)操作直到水基金屬切削液變質(zhì)。 由于微生物的繁殖過程中，細(xì)胞的呼吸作用釋放出CO2及降解過程中產(chǎn)生的有機(jī)酸會(huì)導(dǎo)致pH值下降。因此可通過pH值的降低程度和微生物的繁殖程度等來評價(jià)水基金屬切削液的生物穩(wěn)定性。如圖所示為水基切削液抗微生物測試平臺(tái)。